Puerarin AML-12 Hücrelerinde Metotreksatın Neden Olduğu Hepatotoksisiteden KorurMelek Akıncı1, Cagatay Oltulu2, Elvan Bakar3, Zatiye Ayça Çevikelli Yakut41Trakya Üniversitesi Eczacılık Fakültesi, Farmakoloji Ana Bilim Dalı, Edirne
2Trakya Üniversitesi Eczacılık Fakültesi, Farmasötik Toksikoloji Ana Bilim Dalı, Edirne
3Trakya Üniversitesi Eczacılık Fakültesi, Eczacılık Temel Bilimleri Ana Bilim Dalı, Edirne
4Trakya Üniversitesi Eczacılık Fakültesi, Farmakognozi Ana Bilim Dalı, Edirne
GİRİŞ ve AMAÇ: Puerarin (PR)’in Metotreksat (MTX) nedenli hepatotoksisite üzerindeki etkilerinin incelenmesi hedeflenmiştir.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Çalışmamız AML-12 hücre hattında kontrol, PR, MTX, PR+MTX olacak şekilde dört grup olarak planlanmıştır. Hücre hatlarına uygulanacak madde konsantrasyonları MTT yöntemi ile belirlenmiştir. Oksidatif stresi irdelemek amacıyla süperoksid dismutaz (SOD), katalaz ve glutatyon ekspresyon düzeyleri qRT-PCR analizi ile ölçülmüştür. MTX’ın neden olduğu hepatotoksisitede ve PR’nin hepatoprotektif etkilerinde apoptoz yolaklarının rolünü değerlendirmek amacıyla qRT-PCR analizi ile kaspaz 3 (Cas-3), Cas-9, apoptotik proteaz aktive edici faktör 1, Bax, Bcl-2, p53, ikinci mitokondri türevli kaspaz aktivatörü/doğrudan apoptoz bağlayıcı protein inhibitörü (smac/DIABLO), topoizomeraz (Top) I, Top II gen ekspresyonları incelenmiştir.
BULGULAR: MTX SOD üzerinden antioksidan savunmayı zayıflatmıştır, fakat serbest radikal artışı nedeni ile katalaz ve glutatyon ekspresyonunu artırmıştır. PR+MTX grubunda; MTX grubuna göre SOD ekspresyonunun artmıştır, katalaz ve glutatyon ekspresyonları azalmıştır. PR grubunda, Cas-9, Apaf-1 ve Top I gen ekspresyon düzeyleri azalmıştır. PR+MTX grubunda PR uygulaması Bax, p53 ve smac/DIABLO ekspresyonunu artırarak ve Bcl2 ekspresyonunu azaltarak hasarlı yapıların apoptozla ortadan kaldırılmasını sağlamıştır.
TARTIŞMA ve SONUÇ: PR, MTX’in neden olduğu hepatotoksisiteyi antioksidan etkileri ve apoptoz yolaklarındaki olumlu etkileri ile hafifletmiştir. Fakat PR MTX’e bağlı gelişen DNA’daki çift iplik hasarını önleyemediği ve PR grubunda Top I ekspresyonunda artış geliştiği için, farklı doz çalışmalarına ihtiyaç duyulmaktadır.
Anahtar Kelimeler: Metotreksat, Puerarin, Hepatoprotektif, Oksidatif stres, Apoptoz
Puerarin Protects From Methotrexate Induced Hepatotoxicity In AML-12 CellsMelek Akıncı1, Cagatay Oltulu2, Elvan Bakar3, Zatiye Ayça Çevikelli Yakut41Department of Pharmacology, Trakya University Faculty of Pharmacy, Edirne, Turkey
2Department of Pharmaceutical Toxicology, Trakya University Faculty of Pharmacy, Edirne, Turkey.
3Department of Basic Phamaceutical Sciences, Trakya University Faculty of Pharmacy, Edirne, Turkey.
4Department of Pharmacognosy, Trakya University Faculty of Pharmacy, Edirne, Turkey
INTRODUCTION: The purpose of this study was to look into the effects of puerarin (PR) on methotrexate (MTX)-induced hepatotoxicity in vitro.
METHODS: We designed our research with four groups in the AML-12 cell line: Control, PR, MTX, and PR+MTX. Administered concentration levels to the cell lines were determined with MTT test. To investigate oxidative stress, expression levels of glutathione, superoxide dismutase, and catalase were determined with qRT-PCR analysis. To evaluate role of apoptosis pathways in MTX induced hepatotoxicity and hepatoprotective effects of PR, gene expressions of caspase 3 (Cas-3), Cas-9, apoptotic protease activating factor-1, Bcl-2, Bax, p53, second mitochondria-derived activator of caspase/direct inhibitor of apoptosis-binding protein (smac/DIABLO), topoisomerase (Top) I, Top II were investigated with qRT-PCR.
RESULTS: MTX impaired the antioxidant defense through SOD, but elevated the expression of catalase and glutathione due to increase in free radicals. In the PR+MTX group, SOD expression increased and catalase and glutathione expression decreased compared to the MTX group. Cas-9, Apaf-1, and Top I gene expression levels were reduced in group of PR. In group of PR+MTX, PR application increased expression of Bax, p53, and smac/DIABLO while decreasing the expression of Bcl-2, which resulted in the elimination of damaged structures by apoptosis.
DISCUSSION AND CONCLUSION: PR alleviated the hepatotoxicity caused by MTX with its antioxidant effects and positive effects on apoptosis pathways. However, different dose studies are needed because PR could not prevent double-strand damage in DNA due to MTX and there is an increase in Top I expression in the PR group.
Keywords: Methotrexate, Puerarin, Hepatoprotective, Oxidative Stress, Apoptosis
Sorumlu Yazar: Melek Akıncı, Türkiye
|
|
Yazdır
Alıntıyı İndir
RIS
E-Postala
Paylaş
Yazara e-posta gönder
PubMed