Kisspeptin ve nörokinin genlerinin puberte tedavisindeki potansiyel rollerinin değerlendirilmesiHale ÖKSÜZ1, Ali ÜÇKAYABAŞI2, Nermin Seda ILGAZ1, Halil İbrahim ÖKSÜZ3, Semiha DOĞAN4, Seda AKBOLAT4, Mehmet Bertan YILMAZ11Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı, Adana, Türkiye
2Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Adana, Türkiye
3Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi, Biyofizik Anabilim Dalı, Adana, Türkiye
4Çukurova Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoteknoloji Anabilim Dalı, Adana, Türkiye
GİRİŞ ve AMAÇ: Kisspeptin (KP) ve nörokinin (NK), hipotalamik nöronal aktivite ve pulsatilitesini düzenleyerek üreme endokrin eksenini yöneten nöropeptitlerdir. Üreme sağlığındaki kritik rolleri ilk olarak, KP veya NK sinyalini kodlayan genlerin mutasyonlarına bağlı olarak fonksiyonunu yitirmesi sonrası, konjenital hipogonadotropik hipogonadizm ve pubertal gelişim anomalilerinin gösterilmesi ile tanımlanmıştır. Bu çalışmada puberteye girişte etkili rol oynayan KP ve NK’in MKH temelli tedavideki etkinliğini araştırılmış ve bu genlerin ekspresyonlarının pasaj sayısıyla ilişkisi incelenmiştir.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Çalışmamızda 3 adet erişkin sıçan (Rattus norvegicus) kullanılmıştır. Sıçanların kemik iliği ve adipoz dokusundan MKH elde edilmiştir. Daha sonrasında yüzey belirteçleri kullanılarak akım sitometrisinde MKH analizi yapılmış ve RNA izolasyonu gerçekleştirilmiştir. Gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ile KP, NK ve reseptörlerinin gen ifadeleri araştırılmış olup ve pasaj sayısıyla ilişkisi karşılaştırılmıştır. Her bir genin kendi içerisindeki farklı pasajlardaki ekspresyonlarının karşılaştırılmasında Welch paired t-testi kullanılmıştır. İstatistiki önem düzeyi 0.05 olarak kabul edilmiştir (p≤0.05).
BULGULAR: Kültürü yapılan kemik iliği ve adipoz dokuya ait hücrelerin MKH oldukları tespit edilmiştir. Kemik iliği kaynaklı MKH’lerin Real-time PCR sonuçları değerlendirildiğinde, 4. pasaja kıyasla 6. pasajda kisspeptin reseptör gen ifadesinin 14, 7. pasajda ise 29 kat artığı gözlemlenmiştir (p≤0.05). Taşikinin geninde 4. pasaja kıyasla 5. pasajda gen ifadesinin neredeyse tamamen baskılandığı tespit edilmiştir (p≤0.05). Taşikinin resptör geninde, 5. pasaj baz alındığında ise 6. pasajda gen ifadesinin tamamen indüklendiği belirlenmiştir. Adipoz doku kaynaklı MKH’lerin RT- PCR sonuçları değerlendirildiğinde ise, 4. pasaja kıyasla 5. pasajda taşikinin reseptör gen ifadesinin 15, taşikinin gen ifadesinin 30 kat, 7. pasajda ise KP reseptör gen ifadesinin 3 kat artığı tespit edilmiştir (p≤0.05).
TARTIŞMA ve SONUÇ: Kemik iliği ve adipoz doku gibi, bulunması kolay olan bir dokudan MKH elde edebilmenin ileri ki dönemler için tıp dünyasına bir ışık tutacağı düşünülmüştür. Ayrıca puberte dönemine geçişte çok önemli göreve sahip olan KP ve NK genlerinin ifadelerini incelerken pasaj sayılarına dikkat edilmesi, kullanılacak pasajdaki gen ifadeleri göz önünde bulundurularak pasaj sayısının seçilmesi gerektiği sonucuna varılmıştır.
Anahtar Kelimeler: Hücre kültürü, kisspeptin, mezenkimal kök hücre, nörokinin, puberte, RT-PCR
Evaluation of the potential roles of kisspeptin and neurokinin genes in puberty treatmentHale ÖKSÜZ1, Ali ÜÇKAYABAŞI2, Nermin Seda ILGAZ1, Halil İbrahim ÖKSÜZ3, Semiha DOĞAN4, Seda AKBOLAT4, Mehmet Bertan YILMAZ11Cukurova University Faculty of Medicine, Department of Medical Biology, Adana, Turkey
2Cukurova University Faculty of Medicine, Department of Medical Microbiology, Adana, Turkey
3Cukurova University Faculty of Medicine, Department of Biophysics, Adana, Turkey
4Cukurova University Institute of Natural and Applied Sciences, Department of Biotechnology, Adana, Turkey
INTRODUCTION: Kisspeptin (KP) and neurokinin (NK) are neuropeptides that govern the reproductive endocrine axis through regulating hypothalamic neuronal activity and pulsatile. Their critical role in reproductive health was first described by the demonstration of congenital hypogonadotropic hypogonadism and pubertal developmental anomalies following loss of function due to mutations in genes encoding the KP or NK signaling. This study aimed to investigate the efficacy of KP and NK, in mesenchymal stem cell (MSC)-based treatment of different origin, and examine the relationship of the expression of these genes with the passage number.
METHODS: Three adult rats (Rattus norvegicus) were used in our study. MSCs were obtained from bone marrow and adipose tissue of rats. The MSCs were analysed by flow cytometry using surface markers and RNA isolation was performed. Gene expressions of KP, NK and their receptors were investigated by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and their relationship with the passages number was compared. Welch paired t-test was used to compare the expression of each gene at different passages. Statistical significance was accepted as 0.05 (p≤0.05).
RESULTS: The cultured bone marrow and adipose tissue cells were determined to be MSCs. When real-time PCR results of bone marrow-derived MSCs were evaluated, it was observed that kisspeptin receptor gene expression increased 14-fold in the 6th passage and 29-fold in the 7th passage compared to the 4th passage (p≤0.05). In the tachykinin gene, it was found that gene expression was almost completely suppressed in the 5th passage compared to the 4th passage (p≤0.05). In the tachykinin receptor gene, it was determined that gene expression was completely induced in the 6th passage, compared to the 5th passage (p≤0.05). When adipose tissue-derived MSC RT- PCR results were evaluated, it was observed that tachykinin receptor gene expression increased 15-fold, tachykinin gene expression increased 30-fold in the 5th passage, and KP receptor gene expression increased 3-fold in the 7th passage compared to the 4th passage (p≤0.05).
DISCUSSION AND CONCLUSION: MSCs can be obtained from an easily available tissue such as bone marrow and adipose tissue is thought to shed light on the medical science for the future. In addition, it was concluded that the number of passages should be considered when analyzing the expressions of KP and NK genes, which have a very important role in the transition to puberty, and the number of passages should be selected by considering the gene expressions in the passage to be used.
Keywords: Cell culture, kisspeptin, mesenchymal stem cell, neurokinin, puberty, RT-PCR
Sorumlu Yazar: Mehmet Bertan YILMAZ, Türkiye
|
|
Yazdır
Alıntıyı İndir
RIS
E-Postala
Paylaş
Yazara e-posta gönder
PubMed